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在生物制藥和食品工業(yè)中，不銹鋼發(fā)酵罐因其耐用性和衛(wèi)生性而成為發(fā)酵過程的首選設備。補料技術作為發(fā)酵過程中的一個關鍵環(huán)節(jié)，對于維持微生物的生長環(huán)境和提高產(chǎn)物的產(chǎn)量至關重要。本文將探討五種主要的補料方式：插針式、推閥式、四閥組、流量計和定量杯。

1.無菌操作：在整個補料過程中，必須嚴格遵守無菌操作規(guī)程，以防止微生物污染。
2.精確控制：無論是哪種補料方式，都需要精確控制補料量，以保證發(fā)酵過程的穩(wěn)定性。
3.設備維護：定期對補料設備進行檢查和維護，確保其正常運行。
4.記錄和分析：補料過程中的所有數(shù)據(jù)都應詳細記錄，并進行分析，以優(yōu)化補料策略。

（一）插針式補料
插針式補料方式是一種在發(fā)酵罐中進行補料的傳統(tǒng)技術，通過火焰消毒后的插針將物料直接注入發(fā)酵罐中。此種方式的操作較為簡單，易于上手，但其開放性無法完全保證操作過程的無菌性。

步驟：
Step1 先將配好的補料瓶與補料插針連接好，然后包裹好錫箔紙，整體放入滅菌鍋滅菌；
Step2 將滅完菌后的硅膠管安裝到蠕動泵，對接種環(huán)境進行消毒；
Step3 打開堵頭，在火焰包裹下，用補料針刺穿發(fā)酵罐的密封硅膠，再擰緊補料針；
Step4 打開系統(tǒng)進行補料；
Step5 補料完成后，緩慢拔出補料針，并確保密封硅膠恢復原狀并對探針進行清潔，以備下次使用。
穿刺接口如圖所示：

Tips：一般在線滅菌時，由上部堵頭壓住硅膠片；補料探針用硅膠管連接補料瓶進行離位滅菌，雙方都滅菌完成后打開堵頭，用補料探針穿刺硅膠墊。

（二）推閥式補料
推閥式補料方式是在插針式補料上優(yōu)化而來，可以避免在滅完菌的補料瓶內(nèi)部再次暴露在空氣之中。此種方式的操作也相對簡單，易于上手，可以保證其安全性，但是必須要在罐體滅菌之前全部操作完成。

步驟：
Step1 先將配好的補料瓶與補料推閥連接好（此時補料閥為關閉狀態(tài)），然后包裹好錫箔紙，整體放入滅菌鍋滅菌；
 

Step2 將滅菌后的硅膠軟管安裝到蠕動泵內(nèi)；
Step3 打開堵頭，將補料推閥安裝到罐體面板，隨后將罐內(nèi)滅菌完成，再旋轉補料推閥打開補料閥門；

Step4 打開系統(tǒng)進行補料；
Step5 補料完成后再次取下，清潔，以備下次使用。
推閥補料系統(tǒng)因便捷性和相對可靠性，在某些工廠已經(jīng)逐步推廣。它比插針式要降低罐體染菌風險，但非傳統(tǒng)方式，大眾接受程度不如插針式，且造價比插針式貴。

（三）四閥組補料方式
四閥組補料是一種在發(fā)酵過程中常用的補料方式，通常由四個主要閥門組成，分別是進料閥、排氣閥、取樣閥和回流閥。它通過四個閥門的組合使用來控制補料的流向和速度，有效管理發(fā)酵罐內(nèi)的物料流動和壓力平衡。

步驟：
Step1 在補料前，確保四閥組系統(tǒng)已正確安裝并與發(fā)酵罐連接，所有閥門處于關閉狀態(tài)；
Step2 先將配好的補料瓶與e補料隔膜閥連接好（此時隔膜閥為關閉狀態(tài)），然后拆下e隔膜閥（含h排氣隔膜閥和附屬卡盤f,i）,整體放入滅菌鍋滅菌；
Step3 將滅完菌后的硅膠管安裝到蠕動泵，將f,i接口安裝連接好；
Step4 打開蒸汽j閥門，打開發(fā)起排氣閥h閥門，（也可以稍微打開f閥門，對連接罐體內(nèi)部補料管路進行滅菌）對補料管路進行滅菌；
Step5 滅菌完成后，關閉蒸發(fā)j閥門和排氣h閥門，打開補料e閥門和進罐g閥門
Step6 打開系統(tǒng)進行補料；
Step7 在補料完成后，對四閥組進行清洗和消毒，以備下次使用。

四閥組補料系統(tǒng)因其靈活性和可控性，在工業(yè)生產(chǎn)中得到了廣泛應用。由于系統(tǒng)是多個閥門所組成，操作和維護相對復雜，維護成本也較高，但此方案滿足于新GMP法規(guī)要求。

（四）流量計補料
流量計補料方式是利用流量計來測量物料的流量，通過控制閥門或泵來調節(jié)補料量。此種方式適合多種物質（液體和氣體），控制也較為精準。但由于此種方式較為依賴于流量計，所以其選型與校準甚為重要。

此方案一般是大型的發(fā)酵罐的使用方案，發(fā)酵補料系統(tǒng)一般是自帶SIP，CIP的，所以不考慮染菌問題，但此方案由于依賴于流量計測量，所以實際控制精度會有比較大，可以增添稱重模塊來彌補。

（五）定量杯補料
定量杯補料方式是通過計量杯的容積來確定補料量，然后通過控制閥門或泵將物料輸送到發(fā)酵罐中。這種方式勝在計量準確，操作直觀，但缺點就是對于非電導率高的介質，需要更換傳感器，增加了成本。而且還容易存在滅菌死角，可能影響發(fā)酵罐的無菌狀態(tài)。

此方案也是流量計補料的變種方案，補料精度比流量計方案要好，但染菌風險比較大。

每種補料方式都有其獨特的優(yōu)勢和局限性，選擇哪種方式取決于具體的發(fā)酵工藝要求、設備條件以及操作的便利性。
無論是簡單易行的定量杯補料，還是精確控制的四閥組系統(tǒng)，或是實時監(jiān)控的流量計補料，甚至是直接而有效的插針式補料，它們都為發(fā)酵過程提供了必要的營養(yǎng)支持，確保了微生物的生長和代謝活動。未來的補料技術將更加智能化和自動化，補料過程將實現(xiàn)更高的精確度和更低的人工干預。